استفاده از فراکشن های rp-hplc در بررسی الگوی پروتئینی سلولهای mcf-7 تیمار شده با کرستین توسط الکتروفورز دو بعدی

مقدمه: کرستین فلاونوئیدی است که در تعداد زیادی از گیاهان مانند پیاز، سیب، توت ها، فلفل قرمز و چای سیاه یافت میشود. برخی فعالیتهای بیولوژیک نظیر تنظیم چرخه سلولی، مهار پروتئینهای شوک حرارتی، مهار بیان پروتئین ras و مهار تیروزین کایناز منجر به شناسایی این ماده به عنوان یک عامل ضد سرطان قوی شده است. در تحقیق حاضر به منظور توضیح اثرات مولکولی کرستین بر روی رده سلولی mcf-7 سرطان پستان انسان روشی برای فراکشن گیری از پروتئوم سلول ها قبل از انجام الکتروفورز دوبعدی، با به کارگیری کروماتوگرافی مایع فاز معکوس (rp-hplc)، استفاده شد. مواد و روشها: سلول های mcf-7 به مدت 24 ساعت با غلظت 50 میکرومولار کرستین تیمار شدند. پس از لیز سلول ها به منظور فراکشن گیری از پروتئوم آن ها از کروماتوگرافی فاز معکوس به روش گرادیان پله ای بر اساس افزایش غلظت استونیتریل استفاده شد. سپس پروتئین های موجود در هر فراکشن بوسیله sds-page و الکتروفورز دوبعدی مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور مقایسه میزان تغییرات کمی بیان پروتئین ها در ژلهای الکتروفورز دوبعدی مربوط به نمونه های کنترل و تیمار شده از نرم افزار ® image master 2d platinum استفاده شد. نتایج: در بین کل لکه های پروتئینی مشاهده شده، 3 پروتئین با افزایش بیان، 15پروتئین با کاهش بیان، 2 پروتئین حذف شده و 11 پروتئین نوظهور در گروه تیمار نسبت به کنترل مشاهده شد. بحث: مشخص شد که کرستین قادر به ایجاد تغییر در پروفایل پروتئینی رده سلولی mcf-7 می- باشد. با بکارگیری این روش تعداد پروتئین های تغییر یافته قابل مشاهده نسبت به عدم استفاده از فراکشن گیری قبل از الکتروفورز دوبعدی، افزایش می یابد. با استفاده از طیف سنجی جرمی اطلاعات دقیق تری راجع به چرخه های بیوشیمیایی درگیر به دست خواهد آمد.